Меню

Дезинфицирующие средства для микробиологических лабораторий



Методы стерилизации и дезинфекции в микробиологической лаборатории

В микробиологической практике применяют различные дезинфицирующие вещества: 0,2% раствор жавель-солида, 3-5% растворы фенола, 5-10% растворы лизола, 1-5% растворы хлорамина, 3-6% растворы перекиси водорода, 1-5% растворы формалина, растворы сулемы в разведении 1:1000 (0,1%), 70% спирт и др.
Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (гной, кал, моча, мокрота, кровь, спиномозговая жидкость) перед сливом его в канализацию. Обеззараживание проводят сухой хлорной известью или 3-5% раствором хлорамина.
Загрязненные патологическим материалом или культурами микроорганизмов пипетки, стеклянные шпатели, предметные и покровные стекла опускают на сутки в стеклянные банки с 0,2% раствор жавель-солида, 3% раствором фенола или перекиси водорода. Препаровальные иглы, бактериальные петли после употребления немедленно прокаливают на огне.

Рис. 3. Обработка перчаток и стекол 0,2% раствором жавель-солида.

По окончании работы с заразным материалом лаборант должен обработать дезинфицирующим раствором рабочее место и руки. Поверхность рабочего стола протирают кусочком ваты, смоченным 3% раствором фенола. Руки дезинфицируют 1% раствором хлорамина.

Рис. 4. Сброс патологического материала в дезинфицирующий раствор.

Выбор дезинфицирующего вещества, его концентрация и длительность воздействия (экспозиция) зависят от биологических свойств микроба и от той среды, в которой будет происходить контакт дезинфицирующего вещества с патогенными микроорганизмами. Например, сулема, фенол, спирты непригодны для обеззараживания белковых субстратов (гной, кровь, мокрота), так как под их влиянием происходит свертывание белков, а свернувшийся белок предохраняет микроорганизмы от воздействия дезинфицирующего вещества.
При дезинфекции материала, инфицированного споровыми формами микроорганизмов, применяют 5% раствор хлорамина, 1-2, 5% растворы активированного хлорамина, 5-10% растворы формалина и другие вещества.
Дезинфекцию, которую проводят на протяжении всего дня по ходу работы, называют текущей, а по окончании — заключительной.

Стерилизацию питательных сред осуществляют различными способами в зависимости от тех ингредиентов, которые входят в их состав.

  • Синтетические среды и все агаровые среды, не содержащие в своем составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15-20 мин в автоклаве при температуре 115-120°С.
  • Среды с углеводами и молоком, питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112°С.
  • Среды, в состав которых входят белковые вещества (сыворотка крови, асцитическая жидкость), обеспложиваются тиндализацией или фильтрованием.
  • Для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе нативные белки, пользуются фильтрацией через мембранные фильтры Зейтца.

Подготовленные к употреблению питательные среды проверяют на стерильность.

Подготовка к стерилизации лабораторной посуды

  • Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.
  • Пробирки, флаконы, бутылки, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачек.
  • Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-5 штук или в пеналах.
  • Пастеровские пипетки по 3-5-10-15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

Рис. 5. Подготовка пробирок с тампонами перед стерилизацией (слева) и хранение в закрывающемся шкафу ограниченный срок после стерилизации (справа).

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180?С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. В течение 20-30 минут

Рис. 6. Автоклав – аппарат для стерилизации паром под давлением.

Источник

Дезинфицирующие средства для микробиологических лабораторий

Химические средства дезинфекции широко применяются в клинико-диагностических и микробиологических лабораториях.

Дезинфекцию использованных изделий медицинского назначения (ИМН) и лабораторной посуды проводят способом полного погружения в емкости из стекла или полимерных материалов, заполненные дезинфицирующим раствором. Дезинфицирующий раствор должен проникать во все каналы и полости, чтобы контактировать со всеми поверхностями изделий.

Для изделий или частей изделий, которые не соприкасаются с патогенным материалом (биологическими жидкостями и т. п.), может быть рекомендован способ протирания салфеткой, смоченной в растворе дезинфектанта.

При применении дезинфицирующих средств, обладающих свойством фиксировать органические загрязнения на поверхности лабораторной посуды и ИМН, необходимо перед проведением дезинфекции удалить видимые загрязнения с поверхности и из каналов при помощи салфетки или промыванием водой, соблюдая при этом противоэпидемические правила.

По окончании дезинфекции все изделия необходимо промыть проточной водой или погрузить в емкость с водой. Полости и каналы изделий также должны быть тщательно отмыты от дезинфицирующего препарата.

Читайте также:  Что такое сокрытие денежных средств предприятия

На эффективность проводимой дезинфекции влияют различные физические и химические факторы: температура, концентрация раствора, pH среды, свойства и качество воды, конфигурация обрабатываемых изделий, массивность микробного загрязнения и продолжительность обработки.

Особое значение имеет наличие на ИМН и лабораторной посуде остатков крови, гноя, лекарств и других загрязнений, так как они при обработке нарушают непосредственный контакт дезинфицирующих агентов с микроорганизмами. Поэтому нельзя допускать высыхания на ИМН остатков органических соединений. В тех случаях, когда невозможно провести дезинфекцию и удалить загрязнения в течение ближайших 1-2 ч после использования, ИМН следует замочить в воде в специальном контейнере. Когда появляется возможность провести дезинфекцию, инструменты из контейнера с водой перекладывают в емкость с дезраствором. Использованная для замачивания вода обязательно подвергается обеззараживанию.

Дезинфицирующие средства в зависимости от входящих в их состав активно действующих веществ (ДВ) распределены по следующим группам:

1. Галлоидсодержащие (хлорсодержащие, йодсодержащие, бромсодержащие и др.). ДВ этой группы являются хлор, йод, бром и композиционные средства на их основе.

Для дезинфекции различных объектов в лабораториях в настоящее время широко применяются хлорсодержащие дезинфицирующие средства, содержащие в качестве ДВ активный хлор. Они имеют широкий спектр антимикробного действия, применяются для дезинфекции патологического материала и культур микроорганизмов. К недостаткам этих средств относятся их раздражающее действие на слизистые оболочки верхних дыхательных путей, стойкий запах и корродирующее действие на металлы.

2. Кислородсодержащие. Активно действующими веществами являются активный кислород, перекись водорода, надкислоты, пербораты, озон и композиционные средства на их основе. Большинство средств обладает широким спектром антимикробного действия, не имеет запаха, но корродирует металлы.

3. Альдегидсодержащие. Активно действующими веществами являются формальдегид, глутаровый альдегид, ортофталевый альдегид, альдегид янтарной кислоты, глиоксаль и композиционные средства на их основе. Они обладают широким спектром антимикробного действия, но фиксируют белковые загрязнения на объектах, раздражают верхние дыхательные пути.

4. Поверхностно-активные вещества (ПАВ). К этой группе относятся обладающие антимикробным действием четвертично-аммониевые соединения (ЧАС), амины и амфолитные поверхностные вещества. Они изменяют проницаемость оболочки микробной клетки, поэтому широко используются в композиционных средствах в сочетании с другими дезинфицирующими веществами. Отличительная особенность этих соединений —узкий спектр антимикробного действия, так как не все они обладают вирулицидной и спороцидной активностью. ЧАСы дают моющий эффект, не имеют запаха, не корродируют металлы.

5. Гуанидиносодержащие. В эту группу дезинфицирующих средств входят препараты, активно действующими веществами которых являются полигексаметиленгуанидин фосфат, полигексаметиленгуанидип гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат и композиционные средства на их основе. Особенностью этой группы средств является образование на обработанных поверхностях пленки, обеспечивающей длительное остаточное бактерицидное действие. Препараты этой группы не обладают спороцидной активностью.

6. Спиртсодержащие. В эту группу входят дезинфицирующие средства, действующими веществами которых являются спирты: этанол, пропанол-1, пропанол-2, 2-этиленгексанол, н-пропанол, феноксипропанол, а также композиционные средства на их основе в сочетании с другими действующими веществами. Дезинфицирующие средства этой группы не обладают спороцидным действием, фиксируют на поверхностях загрязнения органического происхождения. Широко применяются в качестве кожных антисептиков.

7. Фенолсодержащие. К этой группе дезинфицирующих средств, разрешенных для применения в ЛПУ, относятся средства на основе 2-бифенола. Они активны в отношении вирусов и споровых форм бактерий. В настоящее время фенолсодержащие препараты не применяются в лабораториях.

8. Кислоты. Для дезинфекции используются неорганические и органические кислоты. Неорганические кислоты обладают более сильным действием и более широким спектром антимикробного эффекта, чем органические кислоты. В настоящее время неорганические кислоты не применяются для дезинфекции в лабораториях, а на основе органических кислот зарегистрировано только несколько дезинфицирующих средств.

Качество приготовления рабочих растворов дезинфицирующих средств и проведения дезинфекционных мероприятий можно проверить путем экспресс-контроля. Для проведения экспресс-контроля рабочих растворов дезинфицирующих средств предназначены индикаторы «Дезиконт». Их применение позволяет упростить процесс определения концентраций дезинфицирующих растворов, избежать грубых ошибок при их приготовлении и хранении и уменьшить вероятность использования рабочих дезинфицирующих растворов, концентрации которых не соответствуют методическим указаниям.

Читайте также:  Концентрат универсальное моющее средств

Кроме индикаторных полосок «Дезиконт» для проведения экспресс-анализов рабочих растворов дезинфектантов разработаны индикаторные салфетки «Дезиконт хлор» и «Дезиконт ЧАС». Указанные салфетки предназначены для контроля проведения дезинфекции поверхностей стен помещений, мебели и оборудования хлорсодержащими и четвертично-аммониевыми дезинфицирующими средствами, такими, как хлорамин, хлорная известь, гипохлорит кальция, гипохлорит натрия, нейтральный анолит, дезинфицирующими средствами на основе дихлорциануровой кислоты, а также препаратами Аламинол, Бианол, Бромосепт 50%, Велтодез, Велтолен-Экстра, Бриллиант, Дезэффект, Катамин АБ, Лизоформин 3000, Новодез форте, Новодез 50, Самаровка, Септабик, Септабик 10К, Септодор, Септодор Арома, Септодор Форте, Септустин, Эффект Форте и др.

Требование к дезинфицирующим средствам. На территории Российской Федерации использование любого дезинфицирующего средства возможно только при наличии следующих сопровождающих его документов:
— регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека;
— сертификат соответствия системы ГОСТ Р;
— методические указания (инструкции) по применению, утвержденные в установленном порядке.

Для достижения надежного эффекта уничтожения микроорганизмов необходимо соблюдение основных требований, изложенных в методических указаниях по применению дезинфицирующего препарата:
— нормы расхода;
— концентрации;
— времени экспозиции;
— способа применения;
— кратности обработки;
— препаративной формы средства.

При выборе дезинфицирующего средства следует учитывать:
— особенности обрабатываемого объекта (материал, размер, наличие загрязнений органической и неорганической природы и т. и.);
— биологические свойства циркулирующих микроорганизмов (длительность существования на объектах внешней среды, устойчивость к тем или иным классам антимикробных веществ);
— активно действующее вещество и его концентрацию, растворимость в воде, способы применения, токсичность, влияние на обрабатываемые объекты и окружающую среду и т. д.

Дезинфицирующие средства, предназначенные для обеззараживания ИМИ, должны обладать вирулицидным действием.

Емкости с дезинфицирующими растворами должны быть снабжены крышками, иметь четкие надписи с указанием препарата, его концентрации, назначения, даты приготовления рабочих растворов.

Приготовление растворов дезинфицирующих средств, их хранение, обеззараживание объектов (способом погружения) следует проводить в специально выделенном и оборудованном помещении.

Ниже представлены сведения, позволяющие правильно выбрать дезинфицирующий препарат.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 29.04.2019

Источник

Дезинфекция в микробиологической лаборатории

Дезинфекция— это обеззараживание объектов окружающей среды с по­мощью химических веществ, обладающих антимикробным действием.

Цель дезинфекции— предупредить передачу возбудителей от инфициро­ванного организма неинфицированному.

В микробиологический лаборатории используют:

1. хлорную известь (0,1 — 10% раствор);

2. хлорамин (0.5 -5% раствор), для дезинфекции рук 0,25 — 0,5% раствор, для дезинфекции предметов ухода за больными при кишечных и воздушно-капельных инфекциях 1-3% раствор, при туберкулезе — 5% раствор;

3. фенол (карболовая кислота) в виде 3 — 5% раствора для дезинфекции по­мещений;

4. лизол (3 — 5% раствор);

5. биглюконат хлоргексидина (гибитан), для дезинфекции рук 0,5% рас­твор, для дезинфекции помещений 0,1% раствор;

6. дихлорид ртути (сулема) — иногда используют для дезинфекции предме­те ухода за больными. Препарат высокотоксичен, всасывается через кожу.

Подготовка посуды к стерилизации

В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого используют специ­альную посуду:

Пробирки

• биологические- с крупным дном, неразвернутым краем;

• центрифужные- сужены книзу, конической формы;

• преципитацию иные- очень узкие с внутренним диаметром 2-3 мм Стеклянные чашкиПетри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеюще­го камней, пузырей. Высота чашки 20-30 мм, диаметр 60-200 мм

Пипетки

• градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа

• пастеровские- стеклянные трубки диаметром 5-7 мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра

Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в су­шильном шкафу

Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5-10 штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук. Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы. Стерилизация проводится в сухожаровом шкафу при температуре 180°С в течение 1 часа.

Читайте также:  Зачем человеку язык как средство общения

Этапы приготовления мазка

Для приготовления мазка необходимо иметь:

• Чистое обезжиренное предметное стекло.
• Бактериологическую петлю
• Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.
• Спиртовку.
• Набор красок.

1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.

Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры на­носят петлей на предметное стекло.

Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал.

Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, рав­номерно растертым, округлой формы, размером 1,5-2 см.

2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре.

3. Фиксация мазка производится с целью:

• Убить микробные клетки.
• Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу.
• Облегчить дальнейшее окрашивание.

Фиксация мазка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пла­мени должно длиться 2 секунды.

Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших использующих химические фиксаторы:

• Метиловый спирт в течении 5-и минут.
• Этиловый спирт (96°) в течении 10-и минут.
• Смесь Никифорова — в течении 10-15 минут.
• Ацетон — в течении 5-и минут.
• Пары формалина — в течении нескольких секунд.

4. Окраска препаратов проводится:

• Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только один краситель;
• Сложными методам, когда определяются клеточные структуры,

После экспозиции мазок промывают водой, высушивают фильтроваль­ной бумагой и микроскопируют под иммерсией.

8) Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)

Световой микроскоп — это обязательная принадлежность любой микробиологической лаборатории. Разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм. Общее увеличение микроскопа определяется произведением объекта на увеличение окуляра.

Микроскопия с сухими объективами дает увеличение в 120-600 раз. Не­достаток: часть лучей отклоняется в сторону и не достигается

хорошее освещение изучаемого объекта. Иммерсионные объективы — это объективы, которые погружают в жидкости (кедровое масло, персиковое мас­ло). Поскольку показатели преломления стекла и иммерсионного масла практи­чески одинаковы 1,52 , сохраняется четкость и ясность поля зрения. Полезное увеличение микроскопа достигает 2000 раз. Современный микроскоп — это точ­ный оптический прибор, поэтому необходимо строго соблюдать ряд правил при работе с ним:

1) использовать правильное освещение;

2) хранить закрытым от пыли;

3) для чистки оптических частей применять кисточку или мягкую ткань, смоченную водой или спиртом. Раз в год микроскоп должен просматривать мастер-оптик.

Метод грамма

Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом Христианом Грамом и является важным таксономическим признаком.

К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.

Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.

Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.

1 .На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.

2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.

3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.

6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.

Метод Циль-Нильсена

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.

Источник